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檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì):不合格標(biāo)本對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響
發(fā)布時(shí)間:2020-01-30 06:53:44瀏覽次數(shù):4339

臨床檢驗(yàn)工作中遇到的不合格標(biāo)本主要表現(xiàn)在溶血、凝血、污染、采集量不足或過(guò)多、標(biāo)識(shí)錯(cuò)誤等。實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對(duì)健康成年人已知無(wú)致病作用的微生物,如用于教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室等。不合格標(biāo)本產(chǎn)生的原因主要包括:
  (1)使用了錯(cuò)誤的容器或添加劑;
  (2)使用了不恰當(dāng)?shù)牟裳骶?,如使用?guī)格過(guò)小或過(guò)大的針頭容器,使用過(guò)大的負(fù)壓真空管等;
  (3)樣本標(biāo)識(shí)錯(cuò)誤;
  (4)標(biāo)本采集過(guò)程中的操作不規(guī)范使標(biāo)本發(fā)生溶血;
  (5)采血量過(guò)少或過(guò)多;
  (6)標(biāo)本污染。不合格標(biāo)本肯定會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果。

  一、血細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類(lèi)計(jì)數(shù)
采血不順暢、抗凝劑比例不當(dāng)或混勻不徹底使得抗凝不充分導(dǎo)致的血液凝固或血細(xì)胞聚集,導(dǎo)致相應(yīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的偏低;聚集的細(xì)胞還可能被儀器誤判為其他細(xì)胞數(shù)量的不準(zhǔn)確。
末梢血采集過(guò)程中過(guò)分?jǐn)D壓造成組織液混入,導(dǎo)致(cause)血小板的聚集,導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)值偏低,同時(shí)組織液的混入還可引起血液的稀釋。
抽血、混勻手法過(guò)于劇烈或添加物不當(dāng)造成的溶血,可導(dǎo)致細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果偏低。在末梢血采集時(shí),消毒劑未完全干燥之前進(jìn)行穿刺可能導(dǎo)致血細(xì)胞的破壞,引起計(jì)數(shù)結(jié)果偏低。
炎癥浸潤(rùn)部位采血導(dǎo)致局部炎癥細(xì)胞的混入,導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的不正常,血細(xì)胞的黏附、聚集合并導(dǎo)致細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)結(jié)果受影響。
血液細(xì)胞學(xué)檢查應(yīng)使用EDTA抗凝,錯(cuò)誤的抗凝劑可能引起血細(xì)胞形態(tài)的變化,造成血細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類(lèi)的不準(zhǔn)確,如草酸鹽和肝素抗凝可引起血小板數(shù)、白細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的偏低。
 

  二、出凝血項(xiàng)目
采血不順暢、血量過(guò)少引起抗凝劑比例不當(dāng)或混勻不徹底使得抗凝劑不充分,導(dǎo)致凝血過(guò)程激活和凝血因子的消耗。這種情況可能引起內(nèi)源性、外源性凝血時(shí)間的延長(zhǎng)以及部分凝血因子測(cè)定結(jié)果的偏低。錯(cuò)誤的抗凝劑如EDT
  A、肝素,尤其是肝素會(huì)造成P
  T、APTT時(shí)間的延長(zhǎng);抽血不順暢,壓脈帶綁扎時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(不宜超過(guò)30s)引起血流淤帶或血管受損可能引起組織因子進(jìn)入血液,造成部分凝血因子測(cè)定結(jié)果降低。

  三、紅細(xì)胞沉降率

標(biāo)本溶血、采血不順暢、抗凝劑比例不當(dāng)或混勻不徹底等使得凝血激活,血漿成分改變,紅細(xì)胞形態(tài)變化等標(biāo)本采集缺陷均可能引起不同程度的紅細(xì)胞聚集,從而引起血細(xì)胞沉降率的加快。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室是由國(guó)家評(píng)的,評(píng)上后以后每年可以從國(guó)家多拿些錢(qián),全國(guó)有幾百個(gè),而且研究方向比較窄。國(guó)家實(shí)驗(yàn)室和國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室是兩個(gè)完全不同的概念,不是一個(gè)重量級(jí)上的,五個(gè)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室也比不上一個(gè)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室。此時(shí)可能引起組織因子進(jìn)入血液,造成部分凝血因子測(cè)定結(jié)果降低。

  四、生物化學(xué)項(xiàng)目
生物化學(xué)主要測(cè)定人體內(nèi)的離子、酶類(lèi)和代謝物質(zhì)。這些物質(zhì)在人體不同組織、細(xì)胞內(nèi)濃度差異比較大,受溶血影響大;部分物質(zhì)如酶類(lèi)和代謝產(chǎn)物穩(wěn)定性差,易降解,還有化學(xué)方法本身特異性較差,易受標(biāo)本中異常物質(zhì)的干擾,因此生物化學(xué)項(xiàng)目的檢測(cè)對(duì)標(biāo)本要求較高。
1。溶血:當(dāng)溶血發(fā)生時(shí),紅細(xì)胞內(nèi)容物進(jìn)入血漿,引起血漿成分的改變,對(duì)一些細(xì)胞內(nèi)外濃度差較大的檢測(cè)項(xiàng)目(如谷草轉(zhuǎn)氨(化學(xué)式:NH3) 酶、乳酸脫氫酶、鉀)的測(cè)定結(jié)果造成較大的影響。
2.脂血:脂血主要是由于血清中的乳糜微粒增多引起的,因后者具有散射光的特性,對(duì)比色法和比濁法均可產(chǎn)生嚴(yán)重的干擾,而且這種干擾不能通過(guò)雙波長(zhǎng)進(jìn)行消除。
3.黃疸:膽紅素在400~540nm波長(zhǎng)處有光吸收,標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或通過(guò)氧化劑后膽紅素還可被氧化為膽綠素、膽褐素,這些物質(zhì)同樣可以引起光吸收的改變,從而影響檢驗(yàn)結(jié)果,對(duì)于單波長(zhǎng)的儀器這種影響更為顯著。
4.抽血不順暢、壓脈帶使用可導(dǎo)致(cause)靜脈血血流的瘀滯,造成血乳酸濃度的升高。

5.血?dú)夥治鰳悠吩跇颖静杉^(guò)程中若未排空氣或未與空氣完全隔離,則可能引起氧分壓測(cè)定結(jié)果升高,二氧化碳分壓測(cè)定結(jié)果降低。


  五、免疫學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目
免疫學(xué)項(xiàng)目是通過(guò)標(biāo)記或不標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)對(duì)被測(cè)物(抗原或抗體)進(jìn)行測(cè)定,由于抗原抗體反應(yīng)具有很好的特異性,因此測(cè)定結(jié)果受影響相對(duì)較少。然而由于免疫學(xué)檢查項(xiàng)目被測(cè)物含量一般較低,若樣本存在缺陷,尤其是交叉污染,一旦發(fā)生,對(duì)結(jié)果產(chǎn)生的影響可能較大。免疫學(xué)測(cè)定常用的方法包括免疫濁度法、酶標(biāo)記顯色的方法,如ELISA和免疫印跡、熒光標(biāo)記的方法、膠體金標(biāo)記的斑點(diǎn)滲濾或?qū)游龇椒ǎ煌臋z測(cè)方法對(duì)標(biāo)本缺陷的敏感性不同。
1.免疫濁度法。使用光學(xué)方法直接對(duì)抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的沉淀進(jìn)行檢測(cè),因此對(duì)標(biāo)本的顏色、透明度比較敏感,嚴(yán)重的溶血、脂血和黃疸可能對(duì)此類(lèi)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生干擾,造成結(jié)果偏高。

2.酶標(biāo)記顯色技術(shù)。通常使用辣根過(guò)氧化物酶等進(jìn)行標(biāo)記并催化底物顯色,標(biāo)本中如有強(qiáng)還原劑污染(如維生素C輸注同側(cè)肢體采血)時(shí),會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響(influence),產(chǎn)生假陰性。另外由于血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶活性,嚴(yán)重的溶血標(biāo)本也可能催化底物顯色,提高本底或產(chǎn)生假陽(yáng)性。

  六、血培養(yǎng)
不合格血培養(yǎng)標(biāo)本主要為污染、血液和培養(yǎng)液比例不當(dāng)、不恰當(dāng)?shù)难囵B(yǎng)瓶。實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)脊椎動(dòng)物生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室,其適用微生物范圍與同級(jí)的一般生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室相同。
1.污染 采集不規(guī)范可以造成污染可能發(fā)生于血培養(yǎng)操作的任何階段,大量研究表明,皮膚定植菌群是血培養(yǎng)污染的常見(jiàn)細(xì)菌,說(shuō)明皮膚消毒的不徹底和采血操作不當(dāng)是污染的主要原因。采血過(guò)程中血液易受到皮膚表面菌群的污染,主要在外周靜脈穿刺時(shí),局部皮膚消毒不徹底,細(xì)菌隨針刺帶入被檢血液而被培養(yǎng)出來(lái)。其次,長(zhǎng)期留置血管導(dǎo)管的患者,其導(dǎo)管長(zhǎng)期暴露于皮膚外界,造成這些菌群的移生。血液培養(yǎng)也常從這些導(dǎo)管處采血,因此經(jīng)常會(huì)在采血過(guò)程中將導(dǎo)管內(nèi)移生的細(xì)菌帶走而培養(yǎng)出來(lái)。即使嚴(yán)格的無(wú)菌操作采集血標(biāo)本也很難將污染率控制在2%以下。血培養(yǎng)污染將導(dǎo)致不必要的抗生素治療,延長(zhǎng)住院時(shí)間,增加患者醫(yī)療費(fèi)用和細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。
2.血液和培養(yǎng)瓶比例不當(dāng) 成人和兒童血培養(yǎng)血量的采集標(biāo)準(zhǔn)不同,應(yīng)嚴(yán)格按照廠家推薦的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行采集,采血量過(guò)多或少均會(huì)降低血培養(yǎng)的陽(yáng)性率。

3.選擇不恰當(dāng)?shù)难囵B(yǎng)瓶 全自動(dòng)血培養(yǎng)瓶的種類(lèi)有普通瓶、中和抗生素瓶、厭氧(Oxygen)瓶、兒童瓶等,每一種培養(yǎng)瓶滿足不同的臨床需求,選擇不恰當(dāng)?shù)难囵B(yǎng)瓶將降低陽(yáng)性率。
七、分子生物學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目
分子生物學(xué)標(biāo)本的不合格常見(jiàn)于抽血操作不規(guī)范引起的外源核酸污染。模板RNA降解以及PCR抑制物的存在。
1.外源核酸感染 由于PCR的靈敏度非常高,理論上一個(gè)核酸分子的污染都有可能引起結(jié)果的假陽(yáng)性,因此PCR標(biāo)本采集最好使用無(wú)菌、無(wú)核酶的一次性器材,取材必須嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作,并小心防止混入操作者或受檢者的毛發(fā)、皮屑等。密封運(yùn)輸和保存,不能在擴(kuò)增區(qū)域進(jìn)行標(biāo)本的采集和處理,防止PCR產(chǎn)物的污染。
2.靶基因的降解 一般情況下,無(wú)菌(意思:沒(méi)有活菌)采集的DNA樣本穩(wěn)定性較好,在室溫下放置8h仍不影響檢驗(yàn),但如果操作不當(dāng)、抽血容器不清潔、放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或有污染,DNA鏈有可能發(fā)生斷裂,使長(zhǎng)片段的擴(kuò)增變得困難。靶基因降解對(duì)于RNA樣品影響更為嚴(yán)重,由于環(huán)境中大量RNA酶的存在,若樣品保存、運(yùn)輸條件不佳或存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng),模板RNA非常容易降解,造成假陰性。

3.PCR抑制物 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR反應(yīng)均為酶促反應(yīng),任何可能抑制這些反應(yīng)的物質(zhì)都會(huì)影響檢驗(yàn)的結(jié)果。樣本采集缺陷導(dǎo)致的常見(jiàn)的抑制物包括肝素、血紅蛋白、乳鐵蛋白、Ig
  G、蛋白酶、纖維素等。

  八、末梢血和靜脈穿刺樣本分析物的差異
盡管末梢血和靜脈血分析物差異很小,但葡萄糖、鉀、總蛋白和鈣等項(xiàng)目的統(tǒng)計(jì)學(xué)和(或)臨床存在顯著性差異。末梢血的血紅蛋白、葡萄糖、鉀檢測(cè)(檢查并測(cè)試)的結(jié)果高于靜脈血,而鈉、氯、鈣、膽紅素和總蛋白的檢測(cè)結(jié)果低于靜脈血。末梢血氧分壓和氧飽和度低于動(dòng)脈血。運(yùn)用末梢血檢測(cè)這些項(xiàng)目時(shí)應(yīng)建立參考范圍(fàn wéi),同時(shí)在檢驗(yàn)報(bào)告上注明標(biāo)本類(lèi)型。

對(duì)于不合格的標(biāo)本,即使實(shí)驗(yàn)室采用最好的方法和技術(shù),檢測(cè)工作都是無(wú)效的勞動(dòng),檢測(cè)結(jié)果會(huì)貽誤患者的及時(shí)診斷和正確治療。因此,正確采集標(biāo)本是臨床檢驗(yàn)分析前階段質(zhì)量保證不可或缺的重要環(huán)節(jié),也是保證臨床檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、有效的基礎(chǔ)。
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